誰說 HIF-1α 的 WB 難做了?
誰說 HIF-1α 的 WB 難做了?
HIF-1α 的 WB 難做嗎？
跟 arigo 這樣做就不難做。
先了解 HIF-1α
HIF-1α (缺氧誘導因子-1α) 是一種轉錄因子，常氧時 (21% O2) 很容易被泛素蛋白酶降解，只有在缺氧條件下 HIF-1α 才可穩定表達。
WB 認不到 HIF-1α 怎麼辦?
HIF-1α 在缺氧條件下才穩定表達，一般的細胞裂解液認不到是正常的，需模擬缺氧條件培養細胞才有辦法認到 HIF-1α 蛋白。如何模擬缺氧條件? (1) 用 Hypoxia Incubator Chamber 養細胞 (2) 加藥物穩定 HIF-1α 蛋白。其中細胞加藥處理對大多數實驗室是比較容易操作的。最常用的藥物是 CoCl2 (50-200 μM 濃度養 4-24 小時)，也有人用 DMOG (0.1-1 mM 濃度養 12-48 小時)。加藥處理過的細胞就很容易用 WB 測到 HIF-1α 蛋白。
HIF-1α分子量是 93 kD? 還是 120 kD?
HIF-1α 的預測分子量是 93 kD，但 HIF-1α 有許多翻譯後修飾，常常 WB 檢測到的是 110-130 kD。不放心的話，再加上對照：常氧細胞裂解液為陰性、CoCl2 處理的細胞裂解液為陽性對照，以確保抗體無誤。
做了所有該做的，還是認不到HIF-1α 怎麼辦?
如果已經做了所有該做的，也有陰、陽性對照，但還是認不到HIF-1α的話? 問題可能出在抗體不夠好。需要好抗體，就用 arigo 的明星 HIF-1α 抗體。
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HIF-1α antibody (ARG10515) |
